Extração de DNA a partir de sangue humano coagulado para aplicação nas técnicas de genotipagem de antígenos leucocitários humanos e de receptores semelhantes à imunoglobulina

Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical

Daniela Maira Cardozo²  Gláucia Andréia Guelsin²  Samaia Laface Clementino²  Fabiano Cavalcante De Melo²  Marco Antônio Braga²  Cleonice De Souza¹  Ricardo Alberto Moliterno²  Jeane Eliete Laguila Visentainer² 

[1] ,Universidade Estadual de Maringá Departamento de Análises Clínicas Laboratório de ImunogenéticaMaringá PR

关键词: Extração de DNA;    Sangue coagulado;    Biologia molecular;    Padronização;    DNA extraction;    Coagulated blood;    Molecular biology;    Standardization;   

DOI  :  10.1590/S0037-86822009000600008

来源: SciELO

【 摘 要 】

O objetivo deste estudo foi padronizar uma metodologia de extração de DNA de alta qualidade a partir de amostras de sangue coagulado. Quarenta e oito amostras de sangue humano coagulado foram utilizadas para a extração de DNA pelo kit comercial EZ-DNA® (Biological Industries, Beit Haemek, Israel), pelo kit de coluna Neoscience® (One Lambda Inc., San Diego, CA) e pelo método modificado de salting out. Apenas o método de salting out foi capaz de extrair altas concentrações de DNA (média, 180ng/µL), as quais foram medidas pelo detector de fluorescência Qubit® (Invitrogen, USA). Este método permitiu a amplificação dos genes HLA (human leukocyte antigens) pela tecnologia PCR-SSO (polymerase chain reaction - specific sequence of oligonucleotides) Luminex, a qual exige DNA de boa qualidade, e de genes KIR (killer cell immunoglobulin-like receptors) pela técnica made in house PCR-SSP (polymerase chain reaction-sequence specific of primers), a qual demanda uma concentração específica de DNA (10ng/µL). Concluímos que a técnica de salting out modificada foi muito eficiente, simples e rápida para a extração de DNA de amostras de sangue humano coagulado, com o objetivo de realizar a genotipagem de genes HLA e KIR.

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