Comparação de três protocolos de extração de DNA a partir de tecido fixado em formol e incluído em parafina

Jornal Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial

José Veríssimo Fernandes²  Rosely De Vasconcellos Meissner¹  Thales Allyrio Araújo De Medeiros Fernandes¹  Luiz Reginaldo Menezes Da Rocha¹  Maulori Curie Cabral¹  Luisa Lina Villa¹ 

[1] ,Universidade Federal do Rio Grande do Norte Departamento de Microbiologia e Parasitologia

关键词: Material parafinado;    Extração de DNA;    PCR;    Paraffin-embedded tissue;    DNA extraction;    PCR;   

DOI  :  10.1590/S1676-24442004000300003

来源: SciELO

【 摘 要 】

OBJETIVO: Padronizar um método alternativo para extração de DNA a partir de tecido fixado em formol e conservado em arquivos de blocos de parafina, visando à realização de estudos retrospectivos. MÉTODOS: Comparou-se a eficiência de protocolos de extração de DNA a partir de tecido parafinado, para análise por reação em cadeia de polimerase (PCR), tomando-se como parâmetro um protocolo baseado em um kit comercial. Foram feitas extrações do DNA de 60 espécimes por três métodos: o protocolo A, baseado no kit GlassMAX; o B, utilizando-se o kit GFX TM; e o C, tendo como base o método de Banerjee et al.(2). A integridade e a suficiência do DNA presente na amostra foram avaliadas pela amplificação por PCR de um segmento de 110pb do gene da beta-globina humana, com visualização por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida, corado pela prata. Resultados: Das 60 amostras analisadas, 45 apresentaram resultado positivo na PCR quando o DNA foi extraído por qualquer um dos três protocolos. Em seis amostras, a amplificação foi positiva apenas para o DNA extraído pelos protocolos A e C. Em três amostras, o resultado foi positivo apenas para o DNA extraído pelo protocolo A, e em duas, apenas para o DNA extraído pelo protocolo C. CONCLUSÕES: O protocolo C apresentou desempenho semelhante ao do protocolo A, com as vantagens de apresentar menor custo, dispensar o uso de kit comercial, além de não utilizar solventes orgânicos, revelando-se uma alternativa viável para a obtenção de DNA a partir de tecido fixado em formol e incluído em parafina.

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