Microdissecção e captura a laser na investigação do gene TP53 em tecidos incluídos em parafina

Jornal Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial

Shadia Muhammad Ihlaseh¹  Maria Luiza Cotrim Sartor De Oliveira¹  Glenda Nicioli Da Silva¹  Carla Adriene Da Silva Franchi¹  João Lauro Viana De Camargo¹ 

[1] ,Universidade Estadual Paulista Faculdade de Medicina de Botucatu Departamento de Patologia

关键词: Microdissecção e captura a laser;    Extração de DNA;    Nested-PCR;    Gene TP53;    Gene ciclofilina;    Blocos de parafina;    Laser-capture microdissection;    DNA extraction;    nested-PCR;    TP53 Gene;    Ciclophilin gene;    Paraffin-embedded tissues;   

DOI  :  10.1590/S1676-24442007000100012

来源: SciELO

【 摘 要 】

INTRODUÇÃO: Microdissecção e captura a laser (MCL) é uma técnica de desenvolvimento recente que permite a coleta de células individuais ou pequeno conjunto de células para análise molecular. Atualmente, no Brasil, há raros microscópios para MCL, de modo que a divulgação dos procedimentos inerentes a essa técnica é oportuna para destacar seu amplo potencial para diagnóstico e investigação. OBJETIVO: Este trabalho descreve a padronização dos procedimentos de MCL e de extração de DNA de material fixado em formalina e incluído em parafina. MATERIAL E MÉTODOS: Foram estudados o éxon 8 do gene TP53 e o gene da ciclofilina em amostras de tecido normal e de neoplasias de fígado e rim provenientes de modelo de carcinogênese química induzida em rato. A extração do DNA foi comprovada por reação em cadeia da polimerase (nested-PCR). RESULTADOS: Foram padronizados os procedimentos de preparo dos cortes histológicos, de microdissecção e captura a laser e de obtenção de seqüências gênicas pela reação de nested-PCR para tecidos incluídos em parafina. Obtivemos amplificação de 48,3% das amostras para o éxon 8 do gene TP53 e 51,7% para o gene da ciclofilina. Considerando pelo menos um dos dois segmentos gênicos, foram amplificadas 79,3% das amostras. DISCUSSÃO E CONCLUSÃO: A extração de DNA de tecidos fixados em formalina e incluídos em parafina e a técnica de nested-PCR foram adequadamente padronizadas para produtos gênicos de interesse, obtidos de material coletado por MCL. Esses procedimentos podem ser úteis para a obtenção de seqüências de DNA de arquivos para análise molecular.

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