방해 물질 제거와 목적 분석물의 농축을 위해 주로 이용되는 샘플 전처리 방법은 liquid-liquid extraction (LLE) 또는 solid phase extraction (SPE) 이다. SPE는 유기 용매의 소모가 적다는 면에서 유용한 분리 방법이다. 일반적으로 sorbent material은 SPE에 있어 중요한 요소이다. Conventional SPE materials는 가격이 비싸고 silica를 기반으로 한다. Silica는 안정하여 분해되기 어렵기 때문에 환경에 해롭다. 최근 독성이 적고, 되도록 자연에 가까운 시약을 이용하는 green analytical chemistry에 대한 관심이 높아지고 있다. Pollen grain (화분립)은 수술의 꽃밥 속에 생기는 가루 같은 생식세포로서, 자연에서 얻은 물질이다. Pollen grain의 외막인 exine은 화학적으로 안정하고 다양한 biopolymer로 구성되어있기 때문에 drug delivery에 이용된 바 있다. 본 연구에서는 소나무의 pollen grain을 SPE sorbent로 이용하였다. 식물의 뿌리 삼출물에 포함된 phenolic acids는 토양 속 미생물의 성장에 영향을 미친다. 미생물이 생산하는 allelochemicals는 식물의 생장을 촉진시키거나 저해시킨다. 즉 토양 속 phenolic acids는 식물의 성장에 영향을 미치는 요소 중 하나이다. 본 연구에서는 SPE sorbent로서 pollen grain을 이용하여 토양 속의 phenolic acids를 추출하여 HPLC/UV로 분석하였다.SPE를 이용한 9종의 phenolic acids 추출 조건은 response surface methodology (RSM)을 이용하여 최적화하였다. 실험 design에 있어서는 central composite design (CCD)를 이용하였다. RSM 결과 추출 최적 조건은 precondition 물의 비율 11%, elution 물의 비율 21%, elution formic acid의 비율 4.5%였다. RSM을 통한 예측값과 위의 최적 조건하에 3회 반복 실험 후 결과값을 비교한 결과 높은 일치성을 보여주었다.본 연구의 결과 실험 조건의 정확한 최적값 도출 및 실험 factor와 response의 관계 등을 파악하는데 있어 RSM을 이용하는 것이 효과적임을 확인하였다. RSM을 이용하면 최소한의 실험 횟수로 ANOVA와 같은 통계 처리를 통해 효율적이고 과학적인 방법으로 최적값을 찾을 수 있다.
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SPE 흡착제로서 화분립을 이용한 phenolic acids 분석법 개발 및RSM을 이용한 최적화