Diferenciação de micobactérias por PCR multiplex

Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical

Diogo Da Rocha Poroca²  Andrea Santos Lima²  Juliana Falcão De Araújo Lima²  Heidi Lacerda Alves Da Cruz²  Rosana De Albuquerque Montenegro²  Fábio Lopes De Melo¹  Haiana Charifker Schindler²  Lílian Maria Lapa Montenegro² 

[1] ,Fundação Oswaldo Cruz Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães Departamento de ImunologiaRecife PE

关键词: Micobactérias;    PCR multiplex;    IS6110;    dnaJ;    hsp65;    Mycobacteria;    Multiplex PCR;    IS6110;    dnaJ;    hsp65;   

DOI  :  10.1590/S0037-86822009000600020

来源: SciELO

【 摘 要 】

O trabalho visou à otimização de um método baseado na reação em cadeia da polimerase multiplex - para diferenciação de micobactérias de interesse para a saúde pública. A PCR Multiplex baseou-se na amplificação simultânea do genehsp65, presente em todo gênero Mycobacterium, do gene dnaJ, presente apenas em Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium e da sequência de inserção IS6110 presente no complexo Mycobacterium tuberculosis, gerando amplicons de 165pb, 365pb e 541pb, respectivamente. O limite de detecção foi de 1fg para o alvo hsp65, 100pg para o dnaJ e 0,1fg para o IS6110. A PCR multiplex detectou até 100pg de DNA de Mycobacterium tuberculosis. O sistema demonstrou ser específico e sensível na detecção de Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, Mycobacterium avium e Mycobacterium smegmatis. Os resultados obtidos utilizando cepas de referência demonstraram que a PCR multiplex pode ser uma ferramenta rápida, sensível e específica na diferenciação de micobactérias.

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