MÉTODOS DE EXTRAÇÃO DE DNA PARA A DETECÇÃO DE Salmonella EM OVOS DE GALINHAS, COM E SEM CASCA, ATRAVÉS DA REAÇÃO EM CADEIA PELA POLIMERASE

Ciência Rural

Maristela Lovato Flôres²  Vladimir Pinheiro Do Nascimento¹  Ivonyr Irene Troglio Abdel Kader¹  Luciana Ruschel Dos Santos¹  Alexandre Pontes Pontes¹  Carlos Tadeu Pippi Salle¹  Rui Fernando Felix Lopes¹ 

[1] ,Universidade Federal de Santa Maria Departamento de Medicina Veterinária Preventiva Santa Maria RS

关键词: Salmonella;    ovos;    extração;    DNA;    PCR;    Salmonella;    eggs;    extraction;    DNA;    PCR;   

DOI  :  10.1590/S0103-84782001000200020

来源: SciELO

【 摘 要 】

O diagnóstico microbiológico de Salmonella sp em amostras de alimentos é demorado, com cinco diferentes etapas, levando cerca de 120 horas até o resultado final. A utilização da técnica da Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) pode diminuir esse período, porém sofre influência de substâncias presentes na amostra que afetam a reação. O objetivo deste trabalho foi comparar dois métodos de extração de DNA, a extração por tratamento térmico e a pelo fenol-clorofórmio, em amostras de 100 ovos de galinhas domésticas artificialmente contaminados com uma cepa de Salmonella enterica sorovar typhimurium em fase estacionária. O material obtido com as extrações foi submetido à PCR, utilizando-se um par de iniciadores que amplificam um fragmento de 284pb do gene InvA de Salmonella sp. Comparando os métodos de extração, observou-se uma diferença na capacidade de detecção de 12% a favor do método do fenol-clorofórmio, quando a extração foi realizada a partir do ovo com casca. No momento em que a mesma metodologia foi usada apenas com a parte interna dos ovos, essa diferença subiu para 26% o que foi significativo (P<0,003), demonstrando que a metodologia de extração foi determinante para melhorar a sensibilidade da técnica. No entanto, ao comparar-se a percentagem de positivos independente da técnica de extração do DNA, observou-se diferença significativa (P<0,047) a favor das amostras de ovos sem casca. Isso sugere que para a detecção de Salmonella por PCR deve-seutilizar apenas a parte interna dos ovos, pois a casca pode determinar interferência na técnica.

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