Diferenciação in vitro de células-tronco mesenquimais da medula óssea de cães em precursores osteogênicos

Pesquisa Veterinária Brasileira

Sílvia A.f. Lima²  Thaila I. Wodewotzky²  João F. Lima-neto²  Patrícia C.b. Beltrão-braga¹  Fernanda C.l. Alvarenga² 

[1] ,Universidade Estadual Paulista Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Departamento de Reprodução Animal e Radiologia VeterináriaBotucatu SP ,Brasil

关键词: Células-tronco mesenquimais;    diferenciação osteogênica;    cão;    célula-tronco dos animais;    Mesenchymal stem cell;    osteogenic differentiation;    dog;   

DOI  :  10.1590/S0100-736X2012000500016

来源: SciELO

【 摘 要 】

O objetivo principal da nossa pesquisa foi avaliar o potencial de diferenciação osteogênica de células-tronco mesenquimais (MSC) obtidas da medula óssea do cão. As MSC foram separadas pelo método Ficoll e cultivadas sob duas condições distintas: DMEM baixa glicose ou DMEM/F12, ambos contendo L-glutamina, 20% de SFB e antibióticos. Marcadores de MSC foram testados, confirmando células CD44+ e CD34- através da citometria de fluxo. Para a diferenciação osteogênica, as células foram submetidas a quatro diferentes condições: Grupo 1, as mesmas condições utilizadas para a cultura de células primárias com os meios DMEM baixa glicose suplementado; Grupo 2, as mesmas condições do Grupo 1, mais os indutores de diferenciação dexametasona, ácido ascórbico e b-glicerolfosfato; Grupo 3, células cultivadas com meios DMEM/F12 suplementado; e Grupo 4, nas mesmas condições que no Grupo 3, mais indutores de diferenciação de dexametasona, ácido ascórbico e b-glicerolfosfato. A diferenciação celular foi confirmada através da coloração com alizarin red e da imunomarcação com o anticorpo SP7/Osterix. Nós observamos através da coloração com alizarin red que o depósito de cálcio foi mais evidente nas células cultivadas em DMEM/F12. Além disso, usando a imunomarcação com o anticorpo SP/7Osterix obtivemos positividade em 1:6 células para o Meio DMEM/F12 comparada com 1:12 para o meio DMEM-baixa glicose. Com base nos nossos resultados concluímos que o meio DMEM/F12 é mais eficiente para a indução da diferenciação de células-tronco mesenquimais caninas em promotores osteogênicos. Este efeito provavelmente ocorre em decorrência da maior quantidade de glicose neste meio, bem como da presença de diversos aminoácidos.

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