Utilização de saponina em citometria de fluxo: uma alternativa factível para permeabilização celular

Revista Brasileira de Hematologia e Hemoterapia

Juliana Pereira²  Graciela A. Brocardo-lima¹  Beatriz Beitler²  Dalton A. F. Chamone² 

[1] ,Universidade de São Paulo Faculdade de Medicina Hospital das Clínicas

关键词: Citometria de fluxo;    membrana citoplasmática;    saponina;    permeabilização celular;    antígenos intracelulares;    Flow cytometry;    cytoplasmatic membrane;    saponin;    cellular permeabilization;    intracellular antigens;   

DOI  :  10.1590/S1516-84842007000200006

来源: SciELO

【 摘 要 】

A pesquisa de antígenos intracelulares por citometria de fluxo é essencial para o estudo imunofenotípico das doenças onco-hematológicas. A utilização de saponina para permeabilização celular tem se mostrado eficaz e de menor custo. Com suas propriedades detergentes, permeabiliza a membrana citoplasmática sem danificá-la ou alterar a expressão dos antígenos de membrana, permitindo a detecção simultânea de antígenos intracelulares e de superfície. O objetivo deste trabalho foi analisar a eficácia da técnica de permeabilização celular com a utilização de saponina como agente permeabilizante. Foram avaliadas 36 amostras de sangue periférico e de medula óssea enviadas ao Laboratório de Imunopatologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo para estudo imunofenotípico. Realizamos a técnica de imunofluorescência direta e utilizamos o programa CellQuest (Becton Dickinson, San Jose, CA) do citômetro de fluxo FACSCalibur (Becton Dickinson, San Jose, CA) para aquisição e análise dos dados. Observamos excesso de perda celular quando utilizamos o tampão de lavagem estocado por período superior a sete dias, à temperatura de 2ºC a 8ºC, e perda mínima com tampão de lavagem recém-preparado ou congelado no momento do preparo e descongelado apenas no momento do uso. Para eliminar o excesso de perda celular realizamos análise sistemática das etapas da técnica, o que nos permitiu adequá-la e utilizá-la na rotina de nosso laboratório. Em país de recursos escassos padronizamos uma técnica viável para pesquisar antígenos intracelulares por citometria de fluxo, mais rápida, eficaz e com redução dos custos financeiros em 35%.

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