Diagnóstico e genotipagem do vírus da pseudoraiva por nested-PCR e análise de restrição enzimática

Ciência Rural

Antônio Augusto Fonseca Júnior²  Marcelo Fernandes Carmagos²  Régia Maria Feltrin D'ambros¹  Alexandre Carvalho Braga¹  Janice Ciacci-zanella¹  Marcos Bryana Heinemann¹  Rômulo Cerqueira Leite¹  Jenner Karlisson Pimenta Dos Reis¹ 

[1] ,MAPA Laboratório Nacional Agropecuário Pedro Leopoldo MG ,Brasil

关键词: genotipagem;    nested-PCR;    pseudoraiva;    restrição enzimática;    genotype;    nested-PCR;    pseudorabies;    restriction enzyme analysis;   

DOI  :  10.1590/S0103-84782010005000066

来源: SciELO

【 摘 要 】

A pseudoraiva (PR) é uma enfermidade viral responsável por consideráveis perdas econômicas na indústria de suínos. O vírus da pseudoraiva (PrV) apresenta apenas um sorotipo, mas, por análise de restrição enzimática, foi classificado em quatro genótipos denominados I, II, III e IV. Os métodos usados para genotipagem dependem do isolamento do vírus, da purificação do DNA viral, da restrição enzimática do genoma completo e da visualização após eletroforese. O objetivo deste trabalho foi estabelecer um método mais rápido e sensível para detectar e genotipar o PrV por nested-PCR e análise de restrição enzimática. Vinte isolados do PrV das regiões Sul e Sudeste do Brasil e a estirpe padrão Shope foram replicadas em células PK-15 e submetidas à nested-PCR para o gene da glicoproteína E. Além desses vírus previamente isolados, foram avaliadas 75 amostras clínicas de cérebro de suíno em um total de 25 animais positivos para a PR no isolamento e na soroneutralização viral e 50 amostras negativas provenientes de animais negativos na soroneutralização viral e de granjas sem histórico de PR. Todas as amostras clínicas tiveram resultados compatíveis com o isolamento e a soroneutralização, e a totalidade das amostras positivas foi classificada como genótipo II. A sensibilidade analítica da nested-PCR foi de 10-1,3 TCID50 mL-1. A combinação da nested-PCR e da restrição enzimática foi capaz de detectar e genotipar o vírus com resultados em um a dois dias, sendo mais rápida que os métodos convencionais de restrição do genoma completo que podem demorar até sete dias.

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