Cultivo de células mesenquimais do sangue de cordão umbilical com e sem uso do gradiente de densidade Ficoll-Paque

Revista Brasileira de Cirurgia Cardiovascular

Rosa Sayoko Kawasaki-oyama¹  Domingo Marcolino Braile²  Heloisa Cristina Caldas¹  João Carlos Ferreira Leal¹  Eny Maria Goloni-bertollo¹  Érika Cristina Pavarino-bertelli¹  Mário Abbud Filho¹  Izaura Dos Santos¹ 

[1] ,Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto

关键词: Sangue de cordão umbilical;    Células-tronco mesenquimais;    Células cultivadas;    Técnicas de cultura de células;    Umbilical cord blood;    Mesenchymal stem cells;    Cells;    cultured;    Cell culture techniques;   

DOI  :  10.1590/S0102-76382008000100006

来源: SciELO

【 摘 要 】

OBJETIVOS: Implantação de técnicas de isolamento e cultivo de células-tronco mesenquimais do sangue de cordão umbilical humano, com e sem uso de gradiente de densidade Ficoll-Paque (d=1,077g/ml). MÉTODOS: Dez amostras de sangue de cordão umbilical humano de gestação a termo foram submetidas a dois procedimentos de cultivo de células-tronco mesenquimais: sem gradiente de densidade Ficoll-Paque e com gradiente de densidade. As células foram semeadas em frascos de 25cm² a uma densidade de 1x10(7)células nucleadas/cm² (sem Ficoll) e 1,0x10(6) células mononucleares/cm² (com Ficoll). As células aderentes foram submetidas a marcação citoquímica com fosfatase ácida e reativo de Schiff. RESULTADOS: No procedimento sem gradiente de densidade Ficoll, foram obtidas 2,0-13,0x10(7) células nucleadas (mediana=2,35x10(7)) e, no procedimento com gradiente de densidade Ficoll, foram obtidas 3,7-15,7x10(6) células mononucleares (mediana=7,2x10(6)). Em todas as culturas foram observadas células aderentes 24 horas após o início de cultivo. As células apresentaram morfologias fibroblastóides ou epitelióides. Na maioria das culturas houve proliferação celular nas primeiras semanas de cultivo, mas após a segunda semana, somente três culturas provenientes do método sem gradiente de densidade Ficoll-Paque mantiveram crescimento celular, formando focos confluentes de células. Essas culturas foram submetidas a várias etapas de tripsinização para espalhamento ou subdivisão e permaneceram em cultivo por períodos que variaram de dois a três meses. CONCLUSÃO: Nas amostras estudadas, o isolamento e cultivo de células-tronco mesenquimais do sangue de cordão umbilical humano pelo método sem gradiente de densidade Ficoll-Paque foi mais eficiente do que o método com gradiente de densidade Ficoll-Paque.

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