Detecção de Brucella abortus em tecidos bovinos utilizando ensaios de PCR e qPCR¹

Pesquisa Veterinária Brasileira

Marrielen A.b. Caitano²  Cleber O. Soares¹  Carlos A.n. Ramos¹  André L.j. Ferraz¹  Cristiane C. Sanches¹  Grácia M.s. Rosinha¹ 

[1] ,Universidade Federal de Mato Grosso do Sul Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Programa de Pós-GraduaçãoCampo Grande MS ,Brasil

关键词: Brucelose;    Brucella abortus;    isolamento;    sequenciamento;    extração;    bovinos;    Brucellosis;    Brucella abortus;    isolation;    sequencing;    extraction;    cattle;   

DOI  :  10.1590/S0100-736X2014000600001

来源: SciELO

【 摘 要 】

Objetivou-se no presente estudo avaliar as técnicas reação em cadeia da polimerase (PCR) e PCR em Tempo Real (qPCR) para detectar Brucella abortus, a partir de tecidos bovinos com lesões sugestivas de brucelose. Para isto, 21 fragmentos de tecidos bovinos coletados em abatedouros de Mato Grosso do Sul foram processados e submetidos ao cultivo microbiológico e extração do DNA genômico para realização das reações de PCR e qPCR. No cultivo microbiológico, oito amostras apresentaram crescimento bacteriano e cinco foram confirmadas como B. abortus por PCR. Diretamente das amostras de tecido, DNA do gênero Brucella (oligonucleotídeos IS711) foi detectado em 13 (61,9%) amostras de tecido e 17 (81%) amostras de homogeneizado. Já com os oligonucleotídeos espécie-específicos BruAb2_0168F e BruAb2_0168R, 14 (66%) amostras de tecido e 18 (85,7%) amostras de homogeneizado foram amplificadas. Seis amostras positivas na PCR espécie-específica foram sequenciadas e o best hit na análise BLASTn foi B. abortus. Na qPCR, 21 (100%) amostras de tecidos e 19 (90,5%) amostras de homogeneizado foram positivas para B. abortus. Dez amostras de DNA de sangue bovino de rebanho certificado livre foram utilizadas como controle negativo nas análises de PCR e qPCR utilizando-se os oligonucleotídeos BruAb2_0168F e BruAb2_0168R. Na PCR nenhuma amostra amplificou, enquanto que na qPCR 2 (20%) amplificaram. Conclui-se que as duas técnicas detectam a presença de B. abortus diretamente de tecidos e homogeneizados, porém a qPCR apresentou maior sensibilidade. Os resultados obtidos indicam que a qPCR pode representar uma alternativa rápida e precisa para a detecção de B. abortus diretamente de tecidos, e ser utilizada em programas de vigilância sanitária, por apresentar sensibilidade e especificidade satisfatórias.

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