Experimental infection by Trypanosoma vivax in sheep

Pesquisa Veterinária Brasileira

Guerra, José Luis²  Barbosa, Rossemberg Cardoso¹  Riet-Correa, Franklin¹  Batista, Jael Soares¹ 

[1] Universidade Federal de Campina Grande, Paraíba, Brasil;USP, São Paulo

关键词: Experimental infection;    Trypanosoma vivax;    sheep;    semiarid.;   

DOI  :  10.1590/S0100-736X2006000100007

来源: Colegio Brasileiro de Patologia Animal-CBPA

【 摘 要 】

This paper has the objective to report clinical signs, hematologic changes, and macroscopic and microscopic alterations in sheep infected experimentally with Trypanosoma vivax, isolated from an outbreak in cattle in the semiarid region of the state of Paraíba, northeastern Brazil. Four Santa Inês sheep were inoculated intravenously with 1ml of blood containing 1.85x105 trypomastigotes. Other 4 sheep were used as control. The presence of trypanosomes in the blood and the temperature were recorded daily during the first 30 days and fortnightly from day 31 to day 90 after infection. Also fortnightly, the sheep were weighed and blood samples were obtained for hematological analysis. One inoculated sheep died 75 days after inoculation. The other 3 inoculated and the 4 control sheep were killed 90 days after the beginning of the experiment. T. vivax was observed constantly in the blood of the inoculated sheep from 4-15 days after inoculation. From day 16 to day 30 the parasitemia was lower and irregular. No trypanosomes were observed in the blood after 30 days of infection. A positive linear correlation [Y=0.027x + 38.515, R2=0.944 (P<0.05)] was found between the number of trypanosomes in the blood and body temperature. Significant differences were observed in body weight between inoculated and non-inoculated sheep from day 30 to day 90 after the experiment. From day 30 to day 90 after inoculation trypanosomes were absent or only in low numbers in the blood, and the animals showed anemia and leucopenia. Gross alterations were pale carcasses, enlarged lymph nodes and spleen, and augmented liquid in the peritoneal and pericardiac cavities. Multifocal lymphocytic myocarditis was observed histologically. It is concluded that the isolate is pathogenic to sheep. It is suggested that the semiarid region, where the outbreak occurred, is non-endemic (marginal) for trypanosomosis, and that the disease may occur if the parasite is introduced through vectors. Index terms: Experimental infection, Trypanosoma vivax, sheep, semiarid.     INTRODUÇÃOTripanossomíases são doenças provocadas por protozoários patogênicos do gênero Trypanosoma, que têm larga distribuição e importância econômica na África, principalmente em áreas ocupadas pela mosca tsetse (Glossina spp) (Murray & Trail 1984, Gardiner 1989). A ampla distribuição geográfica de Trypanosoma vivax fora do seu local de origem, o continente africano, é atribuída a sua habilidade de adaptação à transmissão mecânica por insetos hematófagos tais como Tabanus spp e Stomoxys spp (Anosa 1983, Otte & Abuabara 1991). Estudos morfológicos (Gardiner 1989), genéticos (Dirie et al. 1993, Ventura et al. 2001) e bioquímicos (Murray & Clarkson 1982, Dirie et al. 1993) demonstraram similaridade entre isolados de T. vivax sul-americanos com isolados do Oeste da África, que se caracterizam por apresentar alta patogenicidade. No entanto, verifica-se baixa freqüência de manifestação clínica da doença no continente americano, o que não se deve à falta de patogenicidade de T. vivax, e sim às características epidemiológicas e formas de transmissão do parasita (Stephen 1986). Por outro lado, a patogenicidade verificada em condições experimentais está relacionada a grandes quantidades de inóculo utilizados nos experimentos (Desquenes & Gardiner 1993). No entanto, Schenk et al. (2001) não induziram sinais clínicos ou alterações bioquímicas em bovinos inoculados com T. vivax, concluindo que os animais são capazes de estabelecer equilíbrio na relação parasita-hospedeiro quando em bom estado nutricional.Embora em infecções experimentais, caprinos e ovinos são susceptíveis e desenvolvem a doença, a tripanossomíase por T. vivax nessas espécies não é um problema importante em condições naturais, mesmo em países da África onde é relatada a presença da mosca tsetse, pois raramente este vetor se alimenta em pequenos ruminantes (Jordan 1986). Na América Latina não há relatos de surtos de tripanossomíase por T. vivax em pequenos ruminantes e sim, achados casuais do parasita por ocasião de exames hematológicos (Applewaite 1990) ou detecção de anticorpos (Vokaty et al. 1993), porém, sem ocorrência da doença. Nos locais onde são relatados sinais clínicos da enfermidade, principalmente anemia, não foi descartada a possibilidade de ocorrência de doenças com sintomatologia similar, como a haemoncose (Applewaite 1990). Devido à susceptibilidade de caprinos e ovinos a tripanossomíase por T. vivax, estas espécies são freqüentemente utilizadas como modelo experimental na avaliação da virulência e patogenicidade de cepas.Recentemente foi identificado um surto de tripanossomíase por T. vivax em bovinos leiteiros na região semi-árida do Sertão da Paraíba (Riet Correa et al. 2003, Batista 2004). O objetivo deste trabalho foi determinar a patogenicidade e os sinais clínicos associados a infecção por T. vivax em ovinos infectados com a cepa isolada de surto em bovinos.  MATERIAL E MÉTODOS Grupos experimentaisForam utilizados oito ovinos da raça Santa Inês, machos, com idade aproximada de 4 meses. Os animais foram mantidos em baias no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Campina Grande, Campus de Patos, Paraíba.Antes de serem inoculados os ovinos foram mantidos por 2 semanas em observação. Nesse período, os animais foram pesados, dosificados com anti-helmíntico e submetidos a exames clínicos e hematológicos.Depois de constatada a higidez dos animais, realizou-se o sorteio dos mesmos para composição dos grupos experimentais. Quatro animais foram infectados com T. vivax (Ovinos 1, 2, 3 e 4), enquanto os outros foram destinados ao grupo controle (Ovinos 5, 6, 7 e 8).Os dois grupos de animais foram submetidos a condições de manejo idênticas, alimentados à vontade com água, feno de capim "Tifton" e ainda suplementados com ração comercial na quantidade de 1,5% do peso por animal e por dia, durante 90 dias, tempo determinado para o término do experimento.Preparo do inóculo e infecção experimental com Trypanosoma vivaxA cepa de T. vivax empregada na infecção experimental dos ovinos foi isolada do sangue de bovinos afetados durante um surto de infecção natural no município de Catolé do Rocha, Paraíba. Sangue de um bovino com parasitemia foi coletado em ácido etilenodiamino-tetracético disódico (EDTA) a 10% e imediatamente inoculada nos ovinos. Em cada animal do grupo experimental foi inoculado, via intravenosa, com 1ml de sangue contendo 1,85x105 tripomastigotas de T. vivax, estimados de acordo com o método de Brener (1961).Exames clínicos e determinação da parasitemiaNos animais infectados e testemunhas, diariamente, durante 30 dias após a infecção e posteriormente, quinzenalmente, do 31º ao 90º dia, foram realizados exames clínicos, sendo avaliados temperatura retal, aspecto das mucosas aparentes e volume dos linfonodos externos à palpação, assim como o comportamento e estado geral. A parasitemia foi avaliada concomitante a cada exame clínico, pela técnica descrita por Brener (1961).Acompanhamento do pesoApós a primeira pesagem, realizada um dia antes da infecção, os animais foram pesados individualmente a cada quinze dias, por 90 dias.Avaliação hematológicaHemogramas completos foram realizados em todos os animais, um dia antes da infecção e a cada quinze dias após a infecção, por 90 dias. Para análises dos hemogramas foram obtidos 2ml de sangue, através de punção da jugular. As amostras foram acondicionadas em tubos esterilizados contendo 1mg/ml de EDTA. Para realização do hemograma seguiu-se a metodologia descrita por Ferreira Neto et al. (1981).PatologiaForam necropsiados um ovino (nº 4) morto espontaneamente no 75º dia após a infecção e todos os demais animais dos grupos infectado e controle, eutanasiados no fim do período experimental. Colheram-se fragmentos de coração, pulmão, estômago, fígado, pâncreas, baço, rins, intestino delgado, intestino grosso, parótida, paratireóide, tireóide, adrenal e linfonodos que foram fixados em solução tamponada de formol a 10%. Após a fixação, o sistema nervoso central foi cortado em secções transversais que incluíram cortes do córtex frontal, parietal, occipital e temporal, cápsula interna e núcleos da base, tálamo, mesencéfalo a altura dos tubérculos quadrigêmeos, ponte, cerebelo, pendúnculo celebelar, medula oblonga e medula cervical, torácica e lombar. Os tecidos fixados foram incluídos em parafina, cortados a uma espessura de 5 micrômetros e corados pela Hematoxilina e Eosina.Análise estatísticaPara a análise das variações do eritrograma, leucograma, temperatura e peso vivo, foi utilizado o delineamento inteiramente casualizado e realizada análise de variância, utilizando-se o teste de Tu

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