Milk cellularity and colony forming units in mastitis caused by coagulase-positive staphylococci and coagulase negative

Pesquisa Veterinária Brasileira

Langoni, Helio¹  Joaquim, Samea Fernandes¹  Costa, Elizabeth Oliveira da²  Guimarães, Felipe Freitas¹  Menozzi, Benedito Donizete¹ 

[1] Universidade Estadual Paulista, Botucatu, Brazil;Universidade de São Paulo, São Paulo, Brazil

关键词:  Milk quality;    staphylococci;    cellularity;    colony forming units;   

DOI  :  10.1590/S0100-736X2015000600005

来源: Colegio Brasileiro de Patologia Animal-CBPA

【 摘 要 】

:Mastitis is the main affection of cattle intended for dairy production, which significantly impacts the milk production chain, with consequences yet to public health. It was studied aspects related to etiology, cellularity and bacterial count in 10 dairy farms, in the State of São Paulo. There were examined 1148 milking cows, totaling 4584 mammary glands. Cases in which there was isolation coagulase positive staphylococci (CPS) and coagulase-negative staphylococci (CNS) were considered. The results showed microbiota with various different pathogens and CNS (128 cases) and CPS (45), Staphylococcus aureus (90), Streptococcus agalactiae (70), Streptococcus dysgalactiae (69), Streptococcus uberis (29), Corynebacterium spp . (230), Klebsiella pneumoniae (28), Klebsiella oxytoca (2), Escherichia coli (15), Enterobacter spp. (3). The somatic cell count (SCC) related to CPS and CNS showed no differences among the evaluated properties, although with significant differences when evaluating the SCC between both groups of staphylococci, as evidenced by comparing discreet CNS and exuberant CPS (P <0.01), discreet CPS and exuberant CPS (P <0.001) and moderate SCN and exuberant SCP (P <0.01). The evaluation of SCC was related to the intensity of infection, considering how slight growth isolation of up to nine colonies, moderate ten to 29 colonies and lush, with 30 or more colonies, revealed for both groups of staphylococci that the higher the number of colony forming units (CFU), SCC is higher being larger in cases of CPS. The results indicate that the importance of both CPS and CNS when considering the high occurrence of the evaluated properties and the fact that it raises the SCC, which compromises the quality of milk. We conclude that when there is a larger number of CFU, is concomitantly higher SCC/ml of milk, in the case of CPS and CNS, which shows a direct relationship of the intensity of the infectious process with the response of milk cellularity, as well as the relevance of these in the etiology of mastitis and negatives aspects to both the production and the quality of milk produced in properties.Index Terms: Milk quality; staphylococci; cellularity; colony forming unitsIntroduçãoA mastite é reconhecida como a principal doença nos rebanhos leiteiros, pelas perdas econômicas tanto para o produtor como indústria de laticínios, decorrentes tanto da diminuição da produção leiteira como da qualidade do leite (Langoni 2013). Aliado aos aspectos de produtividade ressalta-se, ainda, os relacionados à saúde pública (Sá et al. 2004, De Freitas Guimarães et al. 2013).De ampla etiologia microbiana (Langoni et al. 1998, Pitkälä et al. 2004) tem origem contagiosa e ambiental. As contagiosas são as causadas por micro-organismos conhecidos como "vaca dependentes" que tem como reservatório a glândula mamária como Staphylococcus aureus, várias espécies de Staphylococcus coagulase negativa, Streptococcus agalactiae, Corybacterium bovis e Mycoplasma spp. (Fox et al. 2003, Langoni 2013, Gonçalves et al. 2014, Tomazi et al. 2014), que são transmitidas a partir de vacas infectadas para outras no momento da ordenha pelas mãos dos ordenadores, equipamentos de ordenha e outros fômites de uso comum entre os animais, e as ambientais, que são causadas por micro-organismos, cuja fonte primária é o próprio ambiente onde os animais são mantidos, como camas, sala de ordenha, entre outros, e a transmissão ocorre principalmente após a ordenha. Nesse caso, tem-se as enterobactérias, como Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter spp, Streptococcus uberis e Streptococcus dysgalactiae, Pseudomonas spp., Trueperella pyogenes e as espécies leveduras, fungos e algas, como as do gênero Prototheca (Contreras & Rodríguez 2011).Uma outra classificação refere-se à gravidade do processo infeccioso e os micro-organismos são classificados em patógenos principais ou primários e os secundários, ou ainda, outros pesquisadores referem-se a patógenos maiores ou menores. Os principais são os mais virulentos com importância maior tanto para a saúde do animal como na qualidade do leite (Botaro et al. 2015, Beuron et al., 2014). Os secundários são considerados como parte da microbiota do úbere e tidos como de menor virulência, com menor efeito nos parâmetros que podem monitorar a qualidade do leite como a CCS. Entre os patógenos secundários estão, por exemplo, os Staphylococcus coagulase negativa (SCN) e admite-se atualmente a sua importância nas mastites relacionada tanto à diminuição de produção (Tenhagen et al. 2006) como produção de enterotoxinas e resistência a antimicrobianos (De Freitas Guimarães et al. 2013, Silva et al. 2014).Entre os testes diagnósticos das mastites, a CCS, pode ser considerada como um marcador importante de processos inflamatórios e indicada para o monitoramento da qualidade do leite e saúde da glândula mamária. Além de possibilitar a detecção de mastite subclínica em nível de rebanho, prevê estimativas de perdas de produção láctea devido às mastites. Thiers et al. (2001) salientam que a CCS reflete a extensão do processo inflamatório e que a sua contagem diferencial, caracterizando os neutrófilos polimorfonucleares, os mononucleares e as células epiteliais caracterizam o estágio da inflamação, ou seja, a evolução do processo inflamatório. Os resultados de pesquisa referente à CCS mostram que além do seu aumento nos casos de mastite, também há alterações na composição do leite (dos Reis et al. 2013). O California Mastitis Test (CMT) relaciona-se também com à CCS e é considerado como teste indireto para o seu diagnóstico (Schalm & Noorlander 1957).O número de unidades formadoras de colônias (UFC) é outro parâmetro importante para se avaliar a qualidade do leite produzido em propriedades leiteiras, que pode estar relacionado à ocorrência de mastites e também pela contaminação durante o processo de obtenção do leite, ou seja, os cuidados higiênicos estabelecidos no processo de ordenha, seja a nível animal, ordenhadeira e ambiental (Langoni et al. 2011, Botaro et al. 2013). Os procedimentos higiênicos na cadeia produtiva do leite são pontos críticos para a obtenção de matéria prima de qualidade.Considerando a importância dos Staphylococcus coagulase negativa (SCN) e Staphylococcus coagulase positiva (SCP) como patógenos nas mastites, avaliou-se a CCS e UFC em amostras de leite de vacas com mastites por esses micro-organismos.Material e MétodosPropriedades rurais e animais. Foram utilizadas 10 propriedades rurais, escolhidas por conveniência e interesse de seus proprietários, localizadas no Estado de São Paulo, todas com sistema de ordenha mecânica e com número variável de 100 a 300 vacas em lactação, todas da raça holandesa variedade preto e branco. Foram examinadas 1148 vacas em lactação, totalizando 4584 glândulas mamárias. Individualmente, realizaram-se testes de triagem (Tamis e CMT) totalizando 1318 amostras de leite de animais com mastite.Diagnóstico do processo inflamatório e coleta de amostras. Foi realizado o teste do CMT de acordo com Schalm & Noorlander (1957), colhendo-se amostras com escores de uma a três cruzes após lavagem do teto com água corrente e secagem com papel toalha descartável e desinfecção do óstio do teto com álcool iodado (2,5%) em frascos esterilizados e transportados em caixas isotérmicas contendo gelo reciclável. Foram colhidas, ainda, amostras individuais de ao redor de 25mL de leite de todas as glândulas mamárias positivas ao CMT para CCS em frascos contendo conservante celular Bronopol (Bertrand 1996). A CCS foi realizada por citometria de fluxo em equipamento Bentley (1995), Somacount 300®.Cultivo microbiológico. Foram utilizados os meios ágar-sangue ovino a 5% e ágar McCon

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